๋ถ๋ฅ:์ ๊ธฐํํฉ๋ฌผ
์ด ๋ฌธ์์ ์๋ณธ์ ์ธ๋ถ ์ํค์์ ๊ฐ์ ธ์์ต๋๋ค.
1. ๊ฐ์[ํธ์ง]
์ํธ๋ ๋ค์ด์๋ฏผํ
ํธ๋ผ์์ธํธ์ฐ์ด๋ผ ์ฝ๋๋ค. ์ํธ๋ ๋ค์ด์๋ฏผ์ ์์ธํธ์ฐ์ด 4๊ฐ ๋ถ์ด์๋ ํํ์ด๋ค.
๋น๊ณต์ ์ ์์์ด N์ ๊ฐ๊ฐ 1๊ฐ, ์์ธํธ์ฐ์ ํ์ด๋๋ก์๊ธฐ์ ์๋ ์ฐ์์ ๊ฐ๊ฐ 1๊ฐ์ฉ ์์ด, ์ด 6๊ฐ์ด๋ค. ๋๋ฌธ์ ๊ธ์๊ณผ ๋ฐฐ์ ๊ฒฐํฉ์ ํ ๋, 6๋ฐฐ์๋ฅผ ํ๋ ํฌ๋ ์ดํธ ๋ฆฌ๊ฐ๋๋ก ํ๋ฉด์ฒด ์ฐฉ์ด์จ์ ๋ง๋ค ๋ ๊ธ์๊ณผ 1:1๋ก ๋ฐ์ํ๋ค.
๋น๊ณต์ ์ ์์์ด N์ ๊ฐ๊ฐ 1๊ฐ, ์์ธํธ์ฐ์ ํ์ด๋๋ก์๊ธฐ์ ์๋ ์ฐ์์ ๊ฐ๊ฐ 1๊ฐ์ฉ ์์ด, ์ด 6๊ฐ์ด๋ค. ๋๋ฌธ์ ๊ธ์๊ณผ ๋ฐฐ์ ๊ฒฐํฉ์ ํ ๋, 6๋ฐฐ์๋ฅผ ํ๋ ํฌ๋ ์ดํธ ๋ฆฌ๊ฐ๋๋ก ํ๋ฉด์ฒด ์ฐฉ์ด์จ์ ๋ง๋ค ๋ ๊ธ์๊ณผ 1:1๋ก ๋ฐ์ํ๋ค.
2. ์ด์ฉ[ํธ์ง]
2.1. ์ ์ [ํธ์ง]
EDTA๊ฐ ๊ธ์๊ณผ 1:1๋ก ๋ฐ์ํ์ฌ ์ฐฉ์ด์จ์ ๋ง๋ค๊ธฐ ๋๋ฌธ์ ๊ธ์์ด ์ผ๋ง๋ ์๋์ง ํ์ธํ๋๋ฐ ์ฐ์ธ๋ค. ๊ฐ์ฅ ๋ํ์ ์ผ๋ก Ca2+์ด์จ์ ํ์ธํ ๋, ErioChrome Black T(EBT)[1]๋ผ๋ ๊ธ์ ์ง์์ฝ์ ์ฌ์ฉํ์ฌ ์นผ์๊ณผ ์ฐฉ์ด์จ์ ๋ง๋ ๋ค, EDTA๋ฅผ ์กฐ๊ธ์ฉ ๋ฃ์ด์ฃผ๋ฉด์ ์ ์ ํ๋ค. ์ด ๋ EDTA๊ฐ Ca2+ ์ด์จ๊ณผ ์ฐฉ์ด์จ์ ๋ง๋ค ๋์ ํํ ์์๊ฐ EBT๋ณด๋ค 10๋ฐฐ ์ด์ ํฌ๊ธฐ ๋๋ฌธ์ EDTA๊ฐ ์นผ์๊ณผ ์ฐฉ์ด์จ์ ๋ง๋ค๊ณ , EBT๋ ๋ผ์ด๋ด์ง๋ค.EBT ์ฐฉ์ด์จ๊ณผ EBT์ ์์ด ๋ค๋ฅด๊ธฐ ๋๋ฌธ์ ์์ด ์ผ์ ํด์ง ๋๊น์ง ์ ์ ํ ์ ์๋ค.
2.2. ๋ฐ์ด์คํํฉ๋ฌผ ์ ์ [ํธ์ง]
์ธ๊ท , ํนํ ์ธํฌ๋ฒฝ์ด ์์ ๊ทธ๋์์ฑ๊ท ์ EDTA๊ฐ ์ธํฌ๋ฒฝ์ ์ตํด์ํค๊ธฐ ๋๋ฌธ์ ์ฌ๋งํ ๊ทธ๋์์ฑ๊ท ์ ์ผ์ ๋๋ ์ด์[2]์ EDTA ์ฉ์ก์์ ์ด์๋จ์ ์ ์๋ค. ํฉํฐ๋๊ธ๋ฆฌ์นธ ์ธต์ด ๋ํฐ์ด ๊ทธ๋์์ฑ๊ท ๋ ํ๊ฒฉ์ ์ ๋ฐ๋ ๊ฒ์ ์๋์ง๋ง, ๊ทธ๋์์ฑ๊ท ๊น์ง ํ์คํ ๋ถํด์ํค๋ ค๋ฉด ๋ผ์ด์์์๊น์ง ๋ฃ์ด์ค๋ค.
[1] ์ฃผ์ ์ฌํญ: ์ฌ์ฉ ๋ฒ์๊ฐ pH 7~11์ด๊ธฐ ๋๋ฌธ์ ์์ถฉ์ฉ์ก ์ ์ด์ฉํ์ฌ pH 10 ์ ๋๋ก ๋ง๋ ๋ค ์ ์ ํ๋ค.
[2] ๋๋ต 1mM ์ด์.